Expression Hétérologue Et Purification Partielle D’un Variant De La Protéine Kinase Calcium Et Calmoduline Dépendante (ccamk) De Medicago Truncatula

Résumé: Chez la légumineuse modèle Medicago truncatula, l’établissement des symbioses racinaires, fixatrice d’azote et mycorrhizienne, repose sur l’existence d’une voie commune de signalisation faisant intervenir une protéine kinase calcium et calmoduline dépendante appelée DMI3. En effet, la nature du signal perçu par la plante, facteurs de nodulation ou de mycorhization, entrainerait la formation de signaux calciques différents, reconnus et traités de manière spécifique par DMI3, localisée au niveau du noyau, de façon à diriger les mécanismes symbiotiques de la plante vers l’établissement de la mycorhization ou la formation du nodule. Pour jouer ce rôle, il faudrait que DMI3 soit capable de phosphoryler des cibles différentes selon la nature du signal. Le travail initié dans cette thèse s’est basé sur l’obtention d’une forme tronquée constitutivement active de DMI3 en système hétérologue chez Eschérichia coli puis à la purifier au moyen d’une étiquette StrepTag préalablement introduite dans la construction. Cet outil moléculaire nous permettrait de rechercher et d’identifier des cibles potentielles ou des partenaires interagissant avec DMI3 au moyen d’expériences de phosphorylations in vitro réalisées à partir d’extraits nucléaires. Il serait alors possible de déterminer si parmi ceux-ci se trouvent des protéines spécifiques de l’une ou l’autre des deux symbioses.

Publié dans la revue: