Isolement, Caractérisation Et Purification De Bactériocines Produites Par Des Bactéries Lactiques Autochtones: Études Physiologiques Et Biochimiques

Résumé: Les bactéries lactiques jouent un rôle de premier plan dans la fabrication de produits alimentaires fermentés. Elles contribuent à l'amélioration du goût, de l'aspect et de l'innocuité microbiologique de l'aliment. Ces bactéries produisent en effet une variété de composés à action antimicrobienne tels les acides organiques, le peroxyde d'hydrogène, le diacétyl et les bactériocines. Dans le présent travail, une collection de souches lactiques a été établie, elle comprend 132 souches isolées à partir 48 échantillons de lait fermentés de façon artisanale et identifiées sur la base d’un certain nombre de caractères morphologiques, physiologiques et biochimiques. La recherche de l’antagonisme bactérien dans le milieu solide a été réalisée suivant la méthode de double couche et la diffusion en puits dans des conditions qui éliminent l’effet de l’acide lactique et du peroxyde d’hydrogène. Parmi les 132 souches testées pour leurs activités antimicrobiennes, 92 sont confirmées productrices de bactériocines. Les résultats montrent que les souches productrices de bactériocines sont fréquemment isolées des produits laitiers. A partir de la collection des bactéries isolées, 5 souches appartenant aux espèces, Lactobacillus. curvatus LB65, Lb. brevis LB93, Lb. plantarum JB44, Lactococcus. lactis subsp. lactis RB22, et Lactococcus. lactis subsp. lactis JB31, ont été sélectionnées. Les bactériocines produites par les souches sélectionnées notamment (Lactobacillus. curvatus LB65, Lb. brevis LB93, Lb. plantarum JB44) possèdent de larges spectres d’activité avec un effet bactéricide et sont thermorésistantes et stables dans une large gamme de pH. Il a par ailleurs été démontré que la souche Lactobacillus. curvatus LB65, produit une bactériocine dénommée curvaticine LB65. La procédure de purification de la curvaticine LB65 comporte une filtration du surnageant de culture de la souche productrice, suivie d'une précipitation au sulfate d'ammonium suivie d’une étape de chromatographie sur résine de QAE sephadex A-25 et une HPLC sur échangeur anionique DEAE . Le poids moléculaire de la bactériocine a été estimé à 3,2 KDa par l’électrophorèse en SDS-PAGE et la nature protéique de la bactériocine concentrée a été confirmée par la perte de son activité à la suite d'un traitement aux protéases, elle est également thermorésistant (121°C, 10min) et stable dans une large gamme de pH. Ces caractéristiques confèrent à la curvaticine LB65 un grand intérêt technologique dans le cas de son utilisation dans la biopréservation des aliments.

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