Etude De La Toxicite A Faibles Doses Des Phtalates Et Developpement D'une Metohdologie Analytiques De Leur Dosage Dans L'environnement

Résumé: Le Di (2-ethylhexyl) phtalate (DEHP) est un perturbateur endocrinien omnipresent dans l'environnement, l'evaluation de ses effets trans-generationnels a faibles doses , sur le systeme de reproduction chez le rat et le developpement d'une methodologie analytique alternative de son dosage dans l'eau, en se focalisant sur la maitrise des contaminations environnementales, etaient les deux principaux objectifs de travail de cette these. Une etude trans-generationnelle de toxicite pour la reproduction chez le rat avec les doses de 0.5, 50 et 5000ƒÊg/kgPC/j a ete realisee dans la premiere partie de ce travail. Les principaux parametres reproductifs evalues sont: Concentration spermatique, Testosterone, Puberte, Fertilite et AGD. Une mise au point et la validation d'une methode analytique par HPLC-UV a ete realisee dans la deuxieme partie de ce travail. Conditions operatoires de la methode HPLCUV: phase mobile constituee de 100% Acetonitrile sur une colonne C18, mode isocratique, debit 0.6ml/mn, volume d'injection 50ƒÊl, detection a 225 et 275nm et temps d'analyse de 20mn. Optimisation des procedes de preconcentration par lyophilisation et extraction SPE, application de la methode validee sur les eaux minerales. Les principaux resultats obtenus sont les suivant : Infertilite totale chez les rats F0 exposes pendant la periode post-natale a 5000ƒÊg/kg/j. Reduction de la concentration spermatique de 46%, 24% et 41% chez F0 paternelle aux doses 5000, 50 et 0.5ƒÊg/kg PC/j, respectivement. 47% avec un cas d'azoospermie et 38% chez la descendance F1 paternelle aux doses 50 et 0.5 ƒÊg/kg PC/j, respectivement. Une courbe dose-reponse non monotonique, sous forme "U" inverse a ete observe pour la testosterone de generation F0 exposees pendant la periode post-natale avec une augmentation significative a 50ƒÊg/kg/j. La methode HPLC-UV a ete validee dans le domaine de concentration entre 900-2000ƒÊg/l avec un R2 de 0.999 . Le taux de recouvrement etait de 99.99% avec un RSD de 0.82%. Les LOD et LOQ etaient de 23 et 71ƒÊg/l, respectivement. Les rendements de pre-concentration ont ete de 145 et 70% pour la lyophilisation et extraction SPE, respectivement. En conclusion, l'etude trans-generationnelle a demontre que les doses reglementaires ne sont pas valables pour le DEHP, et la validation analytique a montre que la methode HPLC-UV ne peut pas s'appliquer au dosage du DEHP en traces.

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