Caractérisation Biochimique D’une Pectate Lyase Thermostable Chez Une Espèce D’actinomycète Thermophile, Actinomadura Keratinilytica Cpt20, Isolée Du Compost De Poulet (région Annaba).

Résumé: Dans ce travail de recherche, nous rapportons le criblage d'actinomycètes thermophiles isolées du compost de poulet produisant des pectinases extracellulaires. Ainsi, les différentes investigations ont montré que 29 espèces (de Cpt1 à Cpt29) d’actinomycètes thermophiles secrètent des lyases. Parmi ces espèces, la Cpt20 semble être la plus active par sécrétion de pectate lyase (Pel-20), a été choisie pour une étude approfondie. L’identification moléculaire de l’ARNr16S a permis de classer cette espèce comme étant Actinomadura keratinilytica Cpt20. L’optimisation du milieu de production de la Pel-20 a permis d’avoir un niveau d’activité de l’ordre de 21101,32 UI/ml. Par la suite cette enzyme a été purifiée et caractérisée. La Pel-20 s’est révélé un monomère de masse molaire 34 kDa par SDS-PAGE et 33,12511 kDa par MALDI-TOF/MS. La séquence de l’extrémité NH2-terminale de la Pel-20 (GFATNQGGTTGGAGGTLS), montre une forte homologie avec la superfamille des pectate lyases. La Pel-20 a un pH optimum de 10,5 et une température optimale de 70°C. L’enzyme est inhibée par l'EDTA et activée par le calcium à 1mM ce qui confirme son appartenance à la superfamille des pectate lyases. Le substrat préférentiel de cette enzyme est la pectine faiblement estérifiée (32%). La thermoactivité et la thermostabilité de la Pel-20 ont été améliorées en présence de 1 mM de Ca2 +. Les durées de demi-vie à 70, 80, 90 et 100°C sont respectivement de 18, 12, 7 et 2 h. En conclusion, les propriétés d'alcaliphilicité et de thermostabilité de Pel-20 ont permis de dire que cette enzyme est un candidat potentiel pour des applications futures dans les bioprocédés industriels.

Publié dans la revue: