Etude De L'hydrolyse Enzymatique Par La Trypsine Et La Chymotrypsine Des Protéines Du Lactosérum Bovin Combinée Aux Rayonnements Des Micro-ondes

Résumé: Les Protéines du lactosérum bovin, en particulier la Béta-Lg et l?Alpha-La, sont connues pour leur potentiel antigénique important et leur forte résistance à la digestion enzymatique. L?objectif de ce travail, est d?évaluer l?effet de l?hydrolyse trypsique ou chymotrypsique des protéines du lactosérum bovin sous l?influence de l?irradiation aux microondes.Du lait de vache fraîchement collecté (pH=6,84) est écrémé par centrifugation à 3500 trs/min à 4°C pendant 15 min, puis précipité à pH 4,6 (pH isoélectrique des caséines) par addition de l?HCl 1N. Après dialyse, le lactosérum est aliquoté en quatre lots: Les deux premiers lots sont soumis respectivement à une hydrolyse trypsique et à une hydrolyse chymotrypsique (E/S 1%) combinées aux rayonnements des micro-ondes à 40°C pendant 5 ou 15 minutes. Le troisième et le quatrième lot subissent respectivement une hydrolyse trypsique et une hydrolyse chymotrypsique (E/S 1%) incubées au bain Marie à 40°C pendant 5 ou 15 minutes. Sur les différents lots, sont mesurées la teneur en protéines par la méthode de Lowry et la quantité des fonctions .-NH2 libérées selon la méthode de Doi. Les produits libérés sont analysés par électrophorèse sur gel de polyacrylamide 15% et par chromatographie liquide de haute performance (CLHP). Les résultats obtenus montrent que : L?hydrolyse par la trypsine ou la chymotrypsine du lactosérum sous l?influence de l?irradiation des micro-ondes diminue significativement (p<0,0001) le taux de protéines du lactosérum par rapport à l?hydrolyse au bain Marie, et d?autre part, augmente les quantités de fonctions .-NH2 libres. . L?analyse qualitative par SDS-PAGE des hydrolysats de lactosérum permet d?observer une différence entre les produits de dégradation issus de l?hydrolyse enzymatique sous irradiation par les micro-ondes et ceux libérés dans les conditions classiques. Ceci a été démontré par électrophorèse où des bandes correspondant à des peptides de faibles poids moléculaires apparaissent, alors quelles sont absentes dans les conditions d?hydrolyse classique. Les chromatogrammes obtenus montrent la présence de différents pics d?élutions qui confirment la présence de ces peptides. En conclusion, l?hydrolyse enzymatique (trypsique ou chymotrypsique) du lactosérum bovin combinée aux rayonnements des micro-ondes semble diminuer sa teneur en protéines totales et augmente les quantités de fonctions Alpha-NH2 libres. De même, une vulnérabilité de la Béta-Lg à l?hydrolyse sous micro-ondes a été démontrée par les profils électrophorétiques et les pics d?élutions obtenus en CLHP.

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