Évaluation De L’immunoréactivité Et De L’allergénicité Des Lactoprotéines Bovines Après Hydrolyse Enzymatique Combinée À Un Traitement Micro-ondes. Intérêt Des Biopuces À Allergènes Dans La Multi-détection Des Réponses Ige Spécifiques Chez Des Enfants Poly Sensibilisés Aux Protéines Du Lait De Vache

Résumé: Les allergies représentent un véritable problème de santé publique, aussi bien pour les gênes, perturbations et risques de pathologies graves qu’elles entraînent dans la vie des patients, que par les coûts de santé qu’elles engendrent. Le traitement de cette affection repose sur un régime d’éviction des protéines du lait de vache et l’administration de préparations adaptées et représentées par des hydrolysats de protéines lactées ou autres (riz, collagène). Cependant, aucun de ces hydrolysats n’évite la présence de protéines intactes et une activité résiduelle persiste toujours. À l’aide de sérums de nourrissons ayant une APLV, il est possible de détecter la présence résiduelle de b -lactoglobuline dans les différents laits hypoallergéniques et extensivement hydrolysés. D’une part, la démarche diagnostique de l’allergie aux protéines du lait de vache chez le nourrisson est assurée souvent par la disparition des signes sous éviction du lait et sa substitution ; le test de provocation par voie orale reste l’étalon d’or pour suivre une procédure logique afin de ne pas laisser inutilement un enfant sous un régime sans lait. D’autre part, Le diagnostic est en pleine évolution, non seulement au niveau technique, avec l’intégration de technologies innovantes issues de la génomique et de la protéomique et la découverte de biomarqueurs diagnostiques et pronostiques de maladies, mais aussi au niveau économique, avec le développement du diagnostic préventif. Le but de ce travail est d’évaluer l’impact d’un traitement technologique par les micro-ondes combiné à une hydrolyse enzymatique, des deux protéines majeures du lactosérum bovin, sur leur allergénicité chez la souris comme modèle animal d’allergie et par l’exploration de leur immunoréactivité contre les IgE humaines d’enfants allergiques aux PLV. L’autre objectif de ce travail est de mettre au point un outil diagnostique miniaturisé les « biopuces à allergènes » pour aider le diagnostic de l’APLV et son suivi. La première partie de ce travail expose les différents effets des micro-ondes sur l’hydrolyse enzymatique trypsique et chymotrypsique des deux allergènes majeurs du lait à savoir la BLG et l’ALA , leur immunoréactivité contre les IgG anti BLG et anti ALA, ainsi que l’existence d’une éventuelle anaphylaxie locale après stimulation des fragments intestinaux de la souris BALB/c montés en chambre de Ussing avec les différents hydrolysats produits sous micro ondes. Il a été constaté que les micro-ondes peuvent accélérer les réactions enzymatiques des deux protéines de lactosérum bovin en obtenant des taux d’hydrolyse des protéines plus élevés rapport à ceux obtenus sous chauffage conventionnel. La BLG généralement résistante à l’hydrolyse pepsique a été hydrolysé au bout de 3 minutes à 200W avec 42% de BLG hydrolysée, alors qu’elle reste très résistante à cette même hydrolyse dans les conditions conventionnelles. Les mêmes résultats ont été obtenus lorsque les protéines pures étaient présentes dans le lactosérum bovin. Les résultats de l’immunoréactivité des hydrolysats évaluée par ELISA compétitif ont montrés que les hydrolysats obtenus sous micro-ondes présentaient une très faible reconnaissance par les IgG comparés à ceux de l’hydrolyse conventionnelle. En chambre de Ussing, la stimulation avec les hydrolysats de BLG ne produisait pas d’augmentation du courant de court circuit (Isc) comparée à aux hydrolysats obtenus dans les conditions conventionnelles. Par contre, les hydrolysats d’ALA obtenus sous micro-ondes ou dans les conditions conventionnelles stimulaient significativement l’Isc qui traduit une présence d’anaphylaxie locale. L’étude de l’immunoréactivité des hydrolysats du lactosérum contre les IgE humaines a montré que les hydrolysats pepsiques ne sont pas reconnus par les IgE anti BLG et anti ALA et le taux d’inhibition et comparable à celui de l’hydrolysat commercial Peptijunior®. Cette étude de l’immunoréactivité a été menée suite à la caractérisation des sérums de nouveaux nés allergiques par la technique des biopuces à allergènes, les résultats obtenus sont comparables à ceux obtenus par test ELISA fluorimétrique classique avec plus d’informations sur le profil de sensibilisation. Les observations et les résultats obtenus sur l’hydrolyse enzymatiques menée sous micro-ondes semblent très encourageants et intéressantes rendant compte sur la possibilité des micro-ondes comme traitement physique à déstabiliser les protéines les plus résistantes à la digestion enzymatique et sa capacité à facilité l’accès des enzymes aux régions les plus enfouis des protéines globulaires. D’autre part, la mise au point de la technique des biopuces apparaît être un outil pertinent pour l’étude de la fonctionnalité biologique de l’interaction allergène-IgE, permettant une meilleure compréhension de la relation entre la structure d’une protéine alimentaire et son allergénicité, voire une évaluation du risque allergique des aliments ne nécessitant pas d’essais cliniques systématiques.

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